卵巢組織內富含卵泡、間質細胞及基質纖維，機械研磨易損傷顆粒細胞，酶解不當則會導致活率驟降。傳統搖床方案因無法標準化轉速、溫度與時間，批次間重復性差、細胞碎片多，制備過程既耗力又耗時。上海凈信JX-CKSM-4WK磁珠款單細胞懸液制備儀，以磁珠剪切 + 酶離者酶解的組合策略，讓小鼠卵巢單細胞懸液制備一步到位！

卵巢單細胞制備，為何這么難？

1. 研磨損傷大：機械剪切力過強，顆粒細胞破膜率高，臺盼藍染色死細胞比例上升。

2. 酶解不穩定：搖床轉速、溫度難以精控，消化時間憑經驗，批次重復性差。

3. 碎片干擾多：基質纖維斷裂產生大量細胞碎片，下游流式/測序質控繁瑣。

4. 操作者依賴：傳統方案高度依賴操作者經驗，換人后數據不可復現。

小鼠懸液單細胞制備完整流程

1. 儀器預備：連接JX-CKSM-4WK單細胞制備儀的電源，開機后預熱，在主菜單選取卵巢專用程序，待機備用。

2. 試劑解凍：酶離者消化酶（MJ022 通用解離酶）與終止液（MJ102）提前用流動涼水解凍，充分混勻；切勿使用溫熱水，避免酶活性損失。

3. 取材與預處理：小鼠頸椎脫臼處死后迅速取出雙側卵巢，置于盛有 PBS 的培養皿中冰上保存，用眼科剪將組織充分剪碎（1–2 mm3），減小酶解阻力。

4. 裝管加酶：組織碎塊用 PBS 洗滌 1 次后，轉入 2 mL 消化管；加入 ~1 mL 酶離者消化酶，確保組織完全浸沒。

5. 儀器運行：將消化管固定于模塊，點擊運行；JX-CKSM-4WK 磁珠以程序化方式旋切組織，同步完成機械勻漿與酶解。過程中可隨時暫停查看進度。

6. 過濾與終止：程序結束后，用 70 μm 濾網過濾消化液；按 消化液：終止液 = 1:1 加入 MJ102 終止液，立即中止酶反應。

7. 裂紅與碎片去除：濾液離心（400 g × 5 min），棄上清；沉淀中加入 2 mL MJ103 紅細胞裂解液（含 200 μL FBS），冰上孵育 3–5 min；隨后加入 500 μL PBS + 1 mL MJ101 碎片去除劑，離心棄上清，PBS 洗滌細胞 2 次。

8. 重懸 & 計數：加入適量無菌 PBS 輕柔重懸底部細胞沉淀，即得單細胞懸液。顯微鏡觀察細胞形態，細胞計數儀檢測活率與濃度。

實驗結果分析

鏡下觀察顯示細胞分散良好、形態完整，無明顯聚團或細胞碎片堆積。細胞計數儀結果確認活細胞比例穩定，滿足下游流式細胞術及單細胞測序建庫要求。

實驗操作的注意事項

1. 酶離者單細胞試劑盒溶解后須在–20°C低溫保存，使用前用涼水解凍，切勿使用溫熱水，以免酶活性下降。

2. 取材后全程置于冰上操作，縮短離體時間，維持細胞活性。

3. 洗滌次數不宜過多、時間不宜過長，避免細胞機械損失，建議 PBS 洗滌不超過 2 次。

4. 70μm 濾網過濾后，用 PBS 輕柔沖洗濾膜，最大化回收單細胞。

5. 消化完成后應盡快進行下游實驗，如樣本組織需短期保存，可使用 MJ104 酶離者組織保存液維持活性。