卵巢組織內(nèi)富含卵泡、間質(zhì)細胞及基質(zhì)纖維，機械研磨易損傷顆粒細胞，酶解不當則會導致活率驟降。傳統(tǒng)搖床方案因無法標準化轉(zhuǎn)速、溫度與時間，批次間重復性差、細胞碎片多，制備過程既耗力又耗時。上海凈信JX-CKSM-4WK磁珠款單細胞懸液制備儀，以磁珠剪切 + 酶離者酶解的組合策略，讓小鼠卵巢單細胞懸液制備一步到位！
卵巢單細胞制備，為何這么難？
1. 研磨損傷大：機械剪切力過強，顆粒細胞破膜率高，臺盼藍染色死細胞比例上升。
2. 酶解不穩(wěn)定：搖床轉(zhuǎn)速、溫度難以精控，消化時間憑經(jīng)驗，批次重復性差。
3. 碎片干擾多：基質(zhì)纖維斷裂產(chǎn)生大量細胞碎片，下游流式/測序質(zhì)控繁瑣。
4. 操作者依賴：傳統(tǒng)方案高度依賴操作者經(jīng)驗，換人后數(shù)據(jù)不可復現(xiàn)。
小鼠懸液單細胞制備完整流程
1. 儀器預備：連接JX-CKSM-4WK單細胞制備儀的電源，開機后預熱，在主菜單選取卵巢專用程序，待機備用。
2. 試劑解凍：酶離者消化酶（MJ022 通用解離酶）與終止液（MJ102）提前用流動涼水解凍，充分混勻；切勿使用溫熱水，避免酶活性損失。
3. 取材與預處理：小鼠頸椎脫臼處死后迅速取出雙側(cè)卵巢，置于盛有 PBS 的培養(yǎng)皿中冰上保存，用眼科剪將組織充分剪碎，減小酶解阻力。
4. 裝管加酶：組織碎塊用 PBS 洗滌后，轉(zhuǎn)入消化管；加入酶離者消化酶，確保組織完全浸沒。
5. 儀器運行：將消化管固定于模塊，點擊運行；JX-CKSM-4WK 磁珠以程序化方式旋切組織，同步完成機械勻漿與酶解。過程中可隨時暫停查看進度。
6. 過濾與終止：程序結(jié)束后，用濾網(wǎng)過濾消化液；按消化液：終止液 = 1:1 加入MJ102終止液，立即中止酶反應。
7. 裂紅與碎片去除：濾液離心，棄上清；沉淀中加入MJ103 紅細胞裂解液，冰上孵育幾分鐘后，隨后加入PBS+MJ101 碎片去除劑，離心棄上清，PBS 洗滌細胞。
8. 重懸 & 計數(shù)：加入適量無菌 PBS 輕柔重懸底部細胞沉淀，即得單細胞懸液。顯微鏡觀察細胞形態(tài)，細胞計數(shù)儀檢測活率與濃度。
實驗結(jié)果分析
鏡下觀察顯示細胞分散良好、形態(tài)完整，無明顯聚團或細胞碎片堆積。細胞計數(shù)儀結(jié)果確認活細胞比例穩(wěn)定，滿足下游流式細胞術及單細胞測序建庫要求。
實驗操作的注意事項
1. 酶離者單細胞試劑盒溶解后須在低溫保存，使用前用涼水解凍，切勿使用溫熱水，以免酶活性下降。
2. 取材后全程置于冰上操作，縮短離體時間，維持細胞活性。
3. 洗滌次數(shù)不宜過多、時間不宜過長，避免細胞機械損失，建議 PBS 洗滌不超過 2 次。
4. 濾網(wǎng)過濾后，用 PBS 輕柔沖洗濾膜，最大化回收單細胞。
5. 消化完成后應盡快進行下游實驗，如樣本組織需短期保存，可使用 MJ104 酶離者組織保存液維持活性。
